Ag vs idegrendszer
Országok listája
HungarySzegedi TudományegyetemTermészettudományi és Informatikai Kar (SZTE-TTIK)Nem tanári szakokBiológia BScMindennapok KémiájaKiadott AnyagAg vs idegrendszer
2009.01.25 18:32:16
Az alábbi szöveg egy formázás és képek nélküli előnézete a dokumentumnak. A tökéletes megjelenítéshez jelentkezz be, majd töltsd le a dokumentumot.
Az ezüst felhasználása az idegrendszer kutatásban
Beng Mihály Adrián
Az idegrendszer sejtjei
Golgi-féle ezüstimpregnáció
A Kezdet és a technika lényege
· Camillo Golgi által 1873-ban fedezte fel az ezüst-kromátos festési eljárást, ·
ami forradalmasította a neurológiát. A technika lényege, hogy impregnálás során a kálium-kromáttal és ozmiumtetroxiddal fixált ideg- és gliasejtek körülbelül 1%-a ismeretlen okokból nyúlványaival együtt több nap alatt teljesen átitatódik krómsókkal, amelyeket ezüst-nitráttal ezüst-kromáttá alakíthatunk és láthatóvá tehetünk. Az egész sejt világossárga háttér eltt feketén rajzolódik ki. Az ideg- és gliasejtek mellett gyakran impreglálódnak kapillárisok is. A Golgi-módszer egyaránt alkalmazható perfúziós és immerziós eljárással fixált agyszöveten. Mind a fiatal mind a felntt állatok agyának felhasználásánál jó eredményeket ad.
· · · ·
Folyamat
2. Gyors Golgi-fixálás 3. Ezüstimpregnáció 4. Dehidrálás 5. Beágyazás 6. Végs lépések 1. Perfundálás
Perfundálás
· Az állatot elbb 20-30 ml htött, 0.9%-os NaCl oldattal, majd 200-300 ml,
1%-os glutáraldehidet és 1%-os paraformaldehidet tartalmazó 0.12M-os foszfátpufferes oldattal transzkardiálisan perfundáljuk. · A perfúzió után az agyat vagy gerincvelt óvatosan kivesszük és 3-5 mm-es darabokra vágjuk, végül az elz fixáló oldatban htszekrénybe rakjuk 1 teljes napra.
Gyors Golgi-fixáló
· A fixált szövetdarabokat 100 ml
káliumbikromát-oldatban 2-8 napon át szobahn sötétben inkubáljuk. · Az oldatot mindennap óvatosan megmozgatjuk. · Az inkubáció hossza befolyásolja az impregnációt: 2-4 napos inkubálás: az axon és kollaterálisai impregnálódnak. 6-8 napos inkubálás a szövet megkeményedik: fleg a szóma és a dendritek impregnálódnak.
Ezüstimpregnáció
· Az inkubáció után a szövetdarabokat óvatosan, pár pillanatra desztillált vízbe · · · ·
tesszük, hogy a felületi kromátréteg leoldódjon. A szövet darabokat ezek után pár ml ezüstnitrát-oldatba mártjuk, az oldat és a szövetdarabok azonnal bebarnulnak. Az oldatot óvatosan leöntjük, majd a maradék (90-95 ml) ezüstnitrát-oldatot 18-20 órára a szövetdarabokra öntjük. A reakciót barna üvegben, szobahn kell végezni. Minél tovább inkubáljuk a szövet annál keményebb és törékenyebb lesz.
Dehidrálás
· Az ezüst-kromátos szövetdarabokat 50%-os etanolos oldatban óvatosan
lemossuk, hogy a felületi kromátos csapadékot leoldjuk.
Beágyazás
· A beágyazás eltt pár pillanatra a szövetdarabokat desztillált vízbe mártjuk. · Alacsony olvadású paraffinból vagy Histoplastból a mikrotóm tkéjére
blokkot formázunk, amelybe meleg szikével egy szövetdarab alakjára emlékeztet üreget vágunk. · Az szövetdarabokat egyenként 56 0C-os olvasztott paraffinba tesszük pár percre, ahol intenzív buborékképzdés jelzi, hogy a paraffin a szövetbe hatolva kiszorítja a levegt. · A blokkban kiformált üregbe olvasztott paraffint cseppentünk, majd a szövetdarabot óvatosan, megfelelen orientálva az üregbe helyezzük, majd hagyjuk a blokkot megdermedni.
Végs lépések
· Pár óra múlva a blokkból hagyományos mikrotómmal 80-200 mm vastag
metszeteket készíthetünk. · A metszeteket abszolút etanolba mártott ecsettel óvatosan a mikrotómkésérl és abszolút etanolos Petri-csészébe tesszük. · Ezután a metszeteket 3x váltott 100%-os etanolban 10-10 percig dehidráljuk, majd 3x váltott xilolban 10-10 percig derítjük. · Derítés után a metszetet óvatosan tárgylemezre tesszük és kanadabalzsammal vagy szintetikus fedanyaggal lefedjük.
Végeredmény
· Sikeres Golgi-impregnáció esetén a szövetben az idegsejtek gyakran szinte
teljes nyúványrendszerükkel együtt és a szórványosan elhelyezked gliasejtek láthatók.
Köszönöm a figyelmet!
Hasonló témájú dokumentumok
- 2009-01-25 18:21:25
- 2009-01-25 18:39:59
- 2009-01-25 18:24:25
- 2009-01-25 18:43:06
- 2009-01-25 18:28:13
- 2010-01-11 16:28:37
- 2009-12-03 21:48:16
A mások által feltöltött dokumentumokat értékelheted. Ha úgy ítéled meg, hogy a vizsgára való felkészülés szempontjából hasznos volt egy dokumentum, akkor adj rá sokcsillagos értékelést.
Ha hibákat tartalmaz, vagy egyéb probléma van vele, akkor keveset.
A dokumentumok sorrendje az értékelések alapján adódik. Ami fentebb van a listában, azt hasznosabbnak ítélték társaid. Az új dokumentumok pedig (értékelések hiányában) szintén a lista tetején kezdenek.
Hozzászólások
Ha észrevételed van egy dokumentummal kapcsolatban (például hibát találtál benne), akkor a Hozzászólások részben jelezheted. Az olyan jellegű kérdéseket mint pl.: A 2. feladat 4. sorából milyen átalakítással jutottunk az 5. sorban szereplő képlethez? - szintén ide érdemes írni
Egy tipp az oldalhoz! - Csakúgy mint amikor könyvtárakat/mappákat hozol létre a számítógépeden, egy tantárgyon belül is hasonló analógiával tetszőleges kategóriák és alkategóriák hozhatóak létre. Próbálj mindig a legmegfelelőbb kategóriába tölteni, hogy átlátható legyen a feltöltött dokumentumok szerkezete.
Egy felsőoktatási közösségi oldal amely segít kapcsolatot tartani a hallgatók között, így segítséget nyújt a sikeres tanulmányokhoz...
