Vér - gyakorlat

Országok listájaHungaryPannon EgyetemGeorgikon Mezőgazdaságtudományi Karállattenyésztő mérnökiÁllatélettanVér - gyakorlat

A véralvadás (haemostasis) vizsgálata:
Vérzési idQ, véralvadási idQ, protrombin idQ megállapítása

1. A haemostasis
- fogalma: Az érreakciót, thrombocytareakciót és a véralvadást magában foglaló vérzéscsillapító mechanizmus, amely biztosítja, hogy a vér az érpályán belül megtartja folyékony állapotát, illetve az erekbQl kikerülve lokális véralvadékot hoz létre.
- zavarai: vérzékenység (hemofília-A, B, C) vagy trombosiskészség növekedése
- érreakció: a sérült érszakasz simaizomelemei összehúzódnak, érlumen szqkül
- thrombocytareakció: A sérült érszakasz kollagénrostjaihoz a thrombocyták
hozzákötQdnek (addhézió) és felhalmozódnak (aggregáció).
Fehér thrombus kialakulása.
- véralvadás: proteolitikus láncreakció, amelynek eredményeként fibrin válik ki

2. Véralvadási faktorok
- jelölés: I-XIII. a felfedezés sorrendjében
- I: fibrinogén, II: protrombin, III: szöveti faktor (tromboplasztin, trombokináz)
IV: Ca2+
- K-vitamin dependens Ca2+-kötQ véralvadási faktorok:
*II., VII., IX., X. faktor ³-karboxi-glutaminsavat tartalmaz (Gla): Ca2+ kötés
*a glutaminsav > Gla átalakítást végzQ karboxiláz koenzime a K-vitamin
*a folyamatban a redukált K-vitamin oxidálódik
*dikumarol: az oxidált K-vitamint visszaalakító enzimet gátolja (somkóró)
*warfarin: patkánymérgekben, hatás u.a.

3. A véralvadási kaszkád folyamata
- irreverzibilis proteolitikus láncreakció, pozitív visszacsatolás, kompartment képzés
- extrinsic (exogén) fázis: sérült szövetekbQl felszabaduló szöveti faktor indítja el
- intrinsic út (endogén) fázis: a vér az érfal kollagénrostjaival kerül érintkezésbe
- közös fázis: a X. faktor aktiválásától
- az alvadási folyamat kulcslépése: az aktív trombin megjelenése
*a két befejezQ lépés katalizátora (I. és XIII. faktor aktiválás)
*a megelQzQ lépések felerQsítése
*thrombocyta adhézió és aggregáció serkentése
*az alvadási folyamat leállítása a protein-C rendszeren keresztül
- utolsó fázis: az érsebet elzáró stabilizált fibrin kialakulása
* vörös thrombus : a stabilizált fibrinhálóba alakos elemek is kerülnek
- véralvadék retractiója: a vörös thrombus néhány órán belül összehúzódik, és
vérsavót (szérumot) présel ki magából

4. Az alvadási folyamat leállítása
1. indító szignál megszqnése: a szöveti faktor és a kollagénrostok elszigetelQdése
a vértQl a thrombus által
2. érreakció megszqnése: a sérülést követQen néhány perc múlva, gyorsuló véráramlás
3. alvadási faktorokat inaktiváló rendszer: antitrombin III., heparin, protein-C

5. Fibrinolízis
Az érsérülés kötQszövetes gyógyulása után a keletkezett véralvadék néhány nap alatt
Feloldódik. Proteolitikus folyamat: plazminogén > plazmin > fibrin feloldása.
6. Vérzési idQ meghatározása: Az az idQtartam, amely alatt a bQrön vagy nyálkahártyán ejtett sebbQl a vérzés megszqnik.(helyszíni haemostasis vizsgálat)
- függ: thrombocyták száma, funkciója és az érfal mqködése
- befolyásol: felszín minQsége, szúrás mélysége, vércsepp felitatás módja
- hibaforrás: vércseppet letörölni, sebhez érni nem szabad
- technikája: nyálkahártyán (pofa) vagy bQrön (taréj, fül) 1 cm hosszú és 1-2 mm mély sebet ejtünk  az elsQ csepp vér megjelenésekor stopper indul  a vércseppeket 10 mp-ként a szqrQpapír szélével leitatjuk  utolsó leitatásnál már tiszta marad a szqrQpapír  stopper áll
- élettani vérzési idQ: minden állatfajban 1-5 perc közötti.

7. Véralvadási idQ meghatározása: Az elsQ fibrinszál megjelenéséig, vagy a véralvadás teljes befejezQdéséig eltelt idQ. (helyszíni haemostasis vizsgálat)
- Az elsQ fibrinszál megjelenése alapján
*friss vér > óraüveg > 1 vagy 2 csepp fiziológiás sóoldat + 1 vagy 2 csepp friss
vér > stopper indul > kevergetjük mqanyag pálcikával > fibrinszál > óra áll.
- Az alvadás befejezQdéséig mérve:
*véralvadási idQ mérése üvegcsQben (Lee-White-féle eljárás)
*véralvadási idQ mérése fecskendQben
*aktivált alvadási idQ mérése speciális gyári csQben
-befolyásol: vizsgálati eszköz és felület simasága (durva serkenti)
környezeti hQmérséklet (melegben gyorsabb)

8. ProtrombinidQ meghatározása Az extrinsic és a közös alvadási út tesztje, a máj funkciós zavarainak jelzésére szolgál.
- megadása: abszolút idQ (mp) vagy egészséges egyén PI-idejének %-ában (humán) - vizsgálat: gyári reagenskészlettel
- szükséges: Ca2+ és tromboplasztin mentes plazma
- menete:
*9:1 arányú vér:3,8%-os Na-citrát elegy elQállítása
*a vérminta centrifugálása (10 perc, 2000 1/min)
*a gyári reagensbQl (Ca2+ és tromboplasztin tartalmú) 0,1 ml-t pipettázunk
a kémcsQbe, majd megadott idQre 37°C-os termosztátba tesszük
*a reagenshez adunk 0,2 ml plazmát és indítjuk az órát
*fehér fibrin alvadék keletkezésekor az órát megállítjuk.
- élettani PI-idQ: minden állatfajban kevesebb 20 másodpercnél
- hosszabb PI-idQ: extrinsic és közös út K-vitamin függQ faktorait érintQ zavar

Hematológiai vizsgálatok 1.
Hematokritérték. Vérsejtsüllyedés.

1. Hematokritérték (Ht, packed cell volume , PCV)
- fogalma: A sejtes fázis és a teljes vér egymáshoz viszonyított térfogataránya.
- mértékegység: liter/liter, de kifejezhetQ %-ban is
- befolyásol: *a tényleges érték kb. 5%-kal kisebb, mint a leolvasott
*a vénás Ht-érték 10-12%-kal több mint az artériás
- élettani érték: tyúk 0,32; juh, szm: 0,35; ló: 0,40; kutya: 0,46
*kisebb: vemhes állatokban a vemhesség utolsó harmadában
*nagyobb: újszülöttekben, kis légköri nyomáson, angol telivér lóban
-kóros viszonyok:
*Ht növekedhet
*csökkent vízfelvétel, fokozott vízleadás
*lépkontrakció
*tartós hypoxia
*Ht csökkenhet
*fokozott vízfelvétel
*nagy mértékq vérvesztés
*hemolízis
*csökkent vörösvérsejt képzQdés
-meghatározása:
1. Wintrobe-csQ alkalmazásával
- a csQ feltöltése 100-as jelig heparinnal alvadásban gátolt vérrel
- centrifugálás 30 percen keresztül 5000 1/min fordulatszámon
- a sejtes fázis magasságának leolvasása és kifejezése l/l-ben
2. Mikrohematokrit kapilláris segítségével
- heparinos vérrel a kapilláris feltöltése
- a kapilláris egyik végét gyurmával bedugaszoljuk
- a csövet mikrohematokrit centrifugával 5 percig 1000 1/min
fordulatszámon centrifugáljuk
- milliméterpapíron mérjük az egész folyadék oszlop és az alakos
elemek magasságát.
3. Mérés hematológiai automatával
- alvadásban EDTA-val gátolt vérminta szükséges
- az automata a Ht értéket számítja:
Ht = (vvs.-szám x MCV)/1000
MCV: mean corpuscular volume  vvs. átlagos térfogata
(a sejtszám és sejtátmérQ mérése alapján számított érték)
1. Vérsejtsüllyedés: Az alakos elemek és a plazma elkülönülésének mértéke adott idQegység alatt.
- oka: *alvadásban gátolt vérben a gravitáció miatt a sejtek leülepednek
*a + töltésq vörösvértesteket  töltésq fehréjeburok veszi körül
*a  töltésq burok miatti taszítóerQ akadályozza a sejtek ülepedését
*a fehérjeburok fiziológiás esetben fQleg albuminokból áll
- kóros növekedése:
* gyulladásos vagy daganatos megbetegedések esetén
* az albuminokat a szintén  töltésq, de nagyobb méretq globulinok, fibrinogén
és kóros fehérjék leszorítják > vv.sejtek közötti taszítóerQ csökken
- változása a hematokrit értékkel ellentétes irányú
- élettani értéke: lóban 60-70 mm/óra
szm: 0-2 mm/óra
sertés: 1-14 mm/óra
kutya, macska: 5-10 mm/óra
ember: 2-5 mm/óra
- meghatározása: Westergreen-féle módszer segítségével
* Westergreen-féle állvány és csQ segítségével
* 3,8%-os Na-citráttal alvadásban gátolt vér (4 rész vér 1 rész citrát)
* 0-jelre feltöltött csQ állványba helyezése
* süllyedés leolvasása 1 óra múlva

Hematológiai vizsgálatok 2.
Vörösvérsejtek ozmotikus rezisztenciája.
Hemoglobintartalom.

1. Vörösvérsejtek szerkezete, alakja, méretei
- méret és alak emlQsökben és madarakban eltérQ
- sejthártya, citoplazma jellemzQi, sejtmag és mitokondriumok hiánya (emlQs)

2. Hemoglobin (Hb)
- vérgázokat szállító összetett fehérje (hemoproteid)  HbE, HbF, HbA
- átlagos értéke: fajtól függQen 80-160 g/l (1,5-2,5 mmol/l)
- szintéziséhez szükséges: fémek (Fe, Cu, Co, Mn, Zn)
vitaminok (B6, B12, niacin, folsav, pantoténsav)
aminosavak (pl. lizin, hisztidin)
- 4db hem komponens + globin (4 polipeptidláncból)
- formái: Hb > oxi-Hb (oxigenálódás), karbamino-Hb, karboxi-Hb, met-Hb
- lebontása: epefesték-forgalom – bilirubin I. és II., biliverdin, urobilinogén
- Hb tartalom meghatározása:
1. Fotometriásan
1a. Cián-hemoglobinos módszer
*hemoglobin (Fe2+) + K3Fe(CN) > hemiglobin (Fe3+)
hemiglobin + KCN > hemiglobino-cianid
*5 ml Drabkin-oldat + 20 ¼l vér
*3-5 perc alatt stabil szín, utána extinkció mérése 540-546 nm-en
fotométerrel Drabkin oldattal szemben
*Hb-cianid standard extinkciójának mérése deszt.vízzel szemben
*Hb g%= 0,251 x minta E x (standard Hb g% / standard E)
1b. Oxi-hemoglobinos módszer
*ammónium-hidroxid segítségével (0,007n NH4OH)
2. Sahli-féle kézi hemoglobinométerrel
*híg sósav hatására a Hb barnás színq savhematinná alakul
*az eszköz csövét 6-os, 7-es jelig 0,1n sósavval feltöltjük, majd
20 ¼l vért mosunk bele
* összerázzuk, és deszt.vízzel addig hígítjuk, amíg a standard csQ
színével azonos nem lesz
*a 2-22 abszolút skálán leolvassuk a Hb tartalmat g%-ban

4. Hemolízis: A vörösvérsejt membrán különbözQ károsító hatások következményeként a hemoglobin számára áteresztQvé válik, így az a vérplazmába kerül.
- ozmotikus hemolízis
* vörösvérsejt viselkedése
*hipertóniás oldatban: zsugorodás
*hipotóniás oldatban: duzzadás > hemolízis
- hemolízis fizikai, kémiai hatásokra
*fizikai: hirtelen fagyasztás-felolvasztás, rázás
*kémiai: savak, zsíroldó szerek, felületi feszültséget csökkentQ anyagok

5. Ozmotikus rezisztencia: A vörösvérsejtek azon tulajdonsága, hogy a hipoozmotikus közeget bizonyos mértékig hemolízis nélkül elviselik.
- minimális ozmózisos rezisztencia:
Annak a NaCl oldatnak a koncentrációja, ahol a hemolízis megkezdQdik.
(sárgás-rózsaszínq oldat)
- maximális ozmózisos rezisztencia:
Az a koncentráció, ahol a hemolízis teljessé válik, azaz a vörösvérsejtek
100%-a hemolizál (csQ alján alakos elem nem látható)
- meghatározása:
*higítási sor fiziológiás NaCl oldatból (0,9%-os) és deszt.vízbQl 11 kémcsQben
*minden kémcsQbe 1-2 csepp vért cseppentünk, összerázzuk
*az oldatot 1-2 óráig állni hagyjuk vagy centrifugáljuk
(5 perc 3000-4000 1/min)
*minimális és maximális ozmotikus rezisztencia leolvasása
- befolyásol: a vér és az oldatok pH-értéke 7,35-7,45 legyen

Általános laboratóriumi ismeretek, vérvétel és vérkezelés

1. A laboratóriumi diagnosztika
- vizsgálatok indokai: *klinikailag beteg állat mintája
*egészséges állat egyedi vizsgálata
*egészséges állomány vizsgálata
2. A vér fogalma, fizikai tulajdonságai, élettani szerepe
3. A vér összetétele
- alakos elemek: *vörösvérsejtek (erythrocyta)
*fehérvérsejtek (leukocyta)
*vérlemezkék (thrombocyta)
- vérplazma: *fizikai jellemzQi
*szervetlen és szerves összetevQk
*vérszérum vagy vérsavó fogalma (fibrinogén mentes)
4. A vér laboratóriumi vizsgálata
- hematológiai vizsgálatok (hematokritérték, hemoglobintartalom stb.)
- véralvadás (haemostasis) vizsgálata (vérzési, véralvadási idQ stb.)
- klinikai kémiai vizsgálatok
*elektrolitok (Na, K, Cl) és vízháztartás (ozmolalitás)
*sav-bázis egyensúly (pH, vérgázanalízis stb.)
*fehérjék (albumin, kreatinin stb.)
*szénhidrátok (glükóz, tejsav)
*lipidek (összlipid, triglicerid, koleszterin, szabad zsírsavak, ketonanyagok)
*makro- (Ca, P, Mg) és mikroelemek (Cu, Co, Se, Fe stb.)
*enzimek vizsgálata (pl. AST és ALT aktivitás stb.)
*egyéb: karotin, bilirubin, húgysav, ammónia stb.
- endokrinológia vizsgálatok (vérplazmában mérhetQ hormonszintek)
- mikrobiológiai vizsgálatok (pl. immundiagnosztika-szerológiai próbák)
- parazitológiai vizsgálatok
5. A vérvétel
- általában vénás vérbQl (szükség lehet artériásra is, pl. oxigén kötQ képesség mérése)
- helye: ló: v. jugularis (torkolati véna)
szm: v. jugularis, farokvéna, tQgyvéna vagy tejér
juh, kecske: v. jugularis
sertés: v. cava cranialis, szemzugvéna, fülvéna
madár: szárnyvéna (v. cutanea ulnaris)
nyúl: fülvéna
kutya, macska: v. cephalica antebrachii (bQr alatti véna ága)
v. saphena lateralis (rózsavéna), v. jugularis
- eszközei: tq és fecskendQ, vérvételi csQ, kanül
- típusai: nyílt vagy zárt eljárás
6. Véralvadásgátlás
- fizikai (a kiváló fibrin elválasztása)
*üveggyöngyök + rázogatás; paraffinozott edény)
- kémiai (ionizált kalcium  Ca2+ - megkötése:
*Na- v. K-citrát 3,84%-os oldat - 4 rész vér + 1 rész oldat (vérsejtsüllyedés)
- 9 rész vér + 1 rész oldat (protrombin idQ)
*Na- v. K-oxalát 1,34%-os oldata
*EDTA 1-2%-os oldata (20-10 csepp 10 ml vérhez; madaraknál heparin !)
- biológiai (trombin enzim gátlása)
*heparin: trombin-antitrombin reakció katalizátora
1 ml vérre 0,75 mg heparin szükséges
(3 csepp Heparin injekció 10 ml vérhez – Na-heparinát)
*hirudin: kötQdés a trombinhoz és inaktiválás
7. A laboratóriumi eredményeket befolyásoló tényezQk
- a méréshez kapcsolódó hatások
*preanalitikai hibák (mintavétel, kezelés)
-vérvételei eszközök > hemolízis
-vérvétel módja > hemolízis, lipaemia, hyperglykaemia
-vérminta szállítása > hemolízis, koncentrációváltozás
-vérminta tárolása > hemolízis, koncentrációváltozás
*analitikai hibák
*posztanalitikai hibák
- biológiai tényezQk hatása
*egyedek közötti különbségek (életkor, fajta, ivar)
*egyeden belül érvényeslQ hatások (vemhesség, ellés, takarmányozás, stressz)


Hematológiai vizsgálatok 3.
Vörösvérsejtszám megállapítása.


1. Anémia
- lényege: a mqködQképes hemoglobin koncentrációjának csökkenése a vérben
- okai: *heveny vagy idült vérvesztés
*csökkent hemoglobin és/vagy vörösvérsejt képzés
*fokozott hemolízis
- típusai: *makrocitás
- hiperkróm (B12-vitamin hiánya)
- hipokróm (folsavhiány)
*normocitás, normokróm (heveny vérvesztést követQen)
*mikrocitás
- hipokróm (vashiány, rézhiány, piridoxinhiány)

2. Vörösvérsejtszám meghatározása
1. Mikroszkópos számlálás Bürker-kamrában
*Bürker-kamra: - vastag tárgylemez, középen vonalhálózattal
- beosztás: kis és nagy négyzetek, téglalapok
- kis négyzet területe: 1/400 mm2
- beosztás fölé fedQlemez kerül, alatta 0,1 mm mély vájat
*menete:- vörösvérsejt-pipettába (Melanger) vért szívunk fel
- 0,5 jelig: 200x higítás, 1 jelig: 100x higítás
- 101-es jelig Hayem-oldatot szívunk fel
- összerázás, 2-3 csepp eltávolítása szqrQpapírral
- Bürker-kamra vájatának feltöltése, néhány percig állni hagyjuk
- sejtszámlálás 40 kis négyzetben, majd átlagolás 1 kis négyzetre
*számítás: - db/mm3 = átlag x 4000 x higítás
- T/l = (db/mm3) / 106
*élettani értékek (T/l): szm: 7; ló: 9,5; juh: 12; sertés: 6,5
2. Hematológiai automatával
3. Becslés a hematokritérték alapján
*vvs.szám=Ht / 5 x 100

3. Vörösvérsejtek származtatott értékei
1. Vvs. átlagos hemoglobintartalma (mean corpuscular hemoglobin; MCH)
*MCH = Hb / vvs. szám
*átlag: 12-30 pikogramm (10-12 g)
*sejtenkénti átlagos Hb mennyisége
2. Vvs. átlagos térfogata (mean corpuscular volume; MCV)
*MCV = Ht / (vvs. szám x 1000)
*átlag: 30-70 femtoliter (10-15 l)
3. Vvs. átlagos hemoglobinkoncentrációja (mean corpuscular hem. conc. MCHC)
*MCHC = Hb/Ht vagy =MCH / MCV
*átlag: 300-400 g/l


Hematológiai vizsgálatok 4.
Fehérvérsejtszám megállapítása.


1. A fehérvérsejtszám eltérései
- leukocytosis: az átlagosnál nagyobb fehérvérsejtszám a vérben
*a megszaporodott sejt alapján: neutrophylia, lymphocytosis
- leukopenia: az átlagosnál kisebb fehérvérsejtszám a vérben
- élettani leukocytosis is elQfordulhat:
*stresszhatásra, ellés után (szm), vemhesség alatt (sertés)
- gyulladásos folyamatokban: ált. leukocytosis fordul elQ
- daganatos betegségek:
*leukémia: daganatos eredetq fehérvérsejt-szaporulat a vérben

2. A fehérvérsejtszám meghatározásának módszerei
2.1. Hematológiai automatával: a sejtek elektromos ellenállása alapján számol
2.2. Becsléssel a vérkenetbQl vagy hematokrit-érték alapján
*vérkenet: 400x nagyítással, 1 látótérben 1 fehérvérsejt 0,33x109/liter db-ot jelent
10 látótér adja a reális fehérvérsejtszámot
*hematokrit: 10 cm hem.csQben a fehérvérsejtréteg 1 mm-e 10x109/liter db-szám
2.3. Számlálás Bürker-kamrában
- Melanger-pipettába 0,5-ös jelig (10x higítás) felszívjuk a vért, majd
a 11-es jelig Türk-oldatot (genciánibolya + ecetsav) szívunk fel
- homogenizáljuk, 2-3 cseppet szqrQpapírral eltávolítunk, majd feltöltjük a
Bürker-kamrát
- néhány perc után az alsó és felsQ mezQben, 20-20 nagy négyzet fölött
megszámoljuk a sejteket, és átlagoljuk 1 négyzetre
- számítás: - db/mm3 = átlag x 2500
- G/l = (db/mm3) / 1000
- a Türk-oldat a vvs-eket feloldja, a fehérvérsejtek magját kékre festi,
madárvér esetében a módszer nem alkalmazható

3. A fehérvérsejtszám élettani értékei (G/l)
ló: 5-14
szm: 4-12
sertés: 11-22
juh, kecske: 4-14
kutya,macska: 6-15
humán: 6-8,5

Hasonló témájú dokumentumok

Hozzászólások

... 11.05-1 2. óra 8. előadás a1 analízis architektúra baudelaire bioinformatika dolgozat építésszervezés 1 épszerk excel feladat felvilágosodás feudalizmus gazdasági jog gyakorlatok info információelmélet innováció kamatláb képlet kiadott kritgyak labor lm görbe log logisztika madarak matek mechanika mechanika 2 munkaerő művelődéstörténet növényszervezettan ollmann pol.komm pszichológia regterv román stat1 számítás szamitogep szociálpolitika termelés természet földrajz tételek vetőmag vizsga feladatsor